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Item Optimisation des procédés d'extraction de l'huile essentielle du thym et activité antimicrobienne(2011) Belkheir, Meriem BéliliaLes plantes sont capables de produire des substances naturelles très diversifiées, qui peuvent être très utiles pour l'Homme. Parmi ces substances on cite les huiles essentielles. Notre étude a pour but ; d'une part, l'optimisation paramétrique par l'utilisation des micro-ondes, de l'extraction de l'huile essentielle d'une plante aromatique très répandue en Algérie et très utilisée par les populations locales pour ses vertus médicinales, il s'agit de Thymus pallescens de Noé originaire d'Ain Defla ; d'autre part, la détermination de l'activité antimicrobienne de cette huile. Quatre procédés d'extraction ont été appliqués dans ce travail ; l'Entraînement à la Vapeur d'eau (EV), l'Entraînement à la Vapeur d'eau assisté par Micro-ondes (EVMO), l'Hydrodiffusion (HDiff) et l'Hydrodiffusion assistée par Micro-ondes (HDiffMO). Les résultats de l'optimisation de l'extraction ont montré que les procédés par microondes semblent être les meilleurs du point de vue duré d'extraction (quelques minutes contre 30 min ou plus pour les techniques conventionnelles), les micro-ondes offrent aussi l'avantage de la réduction de la consommation de l'eau et de l'énergie. Les quatre types d'huiles essentielles ont été caractérisés par leur composition chimique grâce à des analyses par CG et CG/SM ; le carvacrol est le constituant majoritaire. Il n'ya pas de différences significatives entre la composition chimique des huiles obtenues à partir des méthodes assistées par micro-ondes et des huiles obtenues par les procédés conventionnelles. La deuxième partie de ce travail montre que les huiles essentielles de Thymus pallescens sont efficaces sur les 12 souches microbiennes testéesItem Optimisation de la production de la protéase de Rhizopus stolonifer sur milieu solide : purification et caractérisation(2011) Gais, SoumeyyaLe but de cette présente investigation est la production, la purification et l’étude de certaines propriétés de la protéase de Rhizopus stolonifer en vue de son utilisation dans la coagulation du lait. L’étude de l’influence de certains paramètres sur le taux de production de la protéase a été réalisée. Il a été constaté que la température optimale de production de la protéase de Rhizopus stolonifer est de 28 °C, son pH optimum est de 6, la taille optimale de l’inoculum est de 2 x 106 spores /ml, le taux d’humidité optimal du son de blé est de 50.6%, la quantité du son de blé optimale est de 10 g et le temps d’incubation optimale est de 96 heures. L’addition de certaines sources de carbone et d’azote au son de blé pour l’amélioration de l’activité coagulante de notre protéase, nous a permis de noter que la meilleure source de carbone et d’azote sont le galactose { 10% et la peptone { 1% respectivement. La purification de la protéase par précipitation au sulfate d‘ammonium à 80% suivie d’une chromatographie par filtration sur gel sephadex G100 a permis de déceler un rendement en activité de la protéase de 9.25%, un facteur de purification de 19.2 avec une activité spécifique de 2850,7 U/mg et un poids moléculaire de 41.4 ± 1.00 kDa. La vérification de l’homogénéité de la protéase de R. stolonifer par électrophorèse en conditions dénaturante a révélée un poids moléculaire de 42.96 ± 1.00 kDa. La caractérisation de la protéase de R. stolonifer a révélé que sa température optimale d’activité coagulante est de 50°C et que sa stabilité est notée aux températures 30 à 45°C. Son pH optimum est de 5.5 et que l’extrait purifié est stable pendant 24 h { 4 °C dans le tampon citrate phosphate. L’étude de l’effet de la concentration en extrait purifié et en chlorure de calcium sur l’activité coagulante de la protéase de R. stolonifer montre que l’augmentation de son activité coagulante est proportionnelle à leurs concentrations respectives. L’extrait purifié de R. stolonifer préserve mieux son activité coagulante au cours de la conservation par congélation à -18°C comparativement à la réfrigération à 4°C. L’inhibition de l’activité coagulante de l’extrait purifié par la pepstatin A à 71%, nous oriente vers la possibilité de la présence d’un groupement aspartyl dans le site actif de la protéase de R. stoloniferItem Optimisation de la production de la protéase acide par aspergillus niger sur milieu solide : purification et caractérisation(2012) Bensmail, SouhilaLa pénurie mondiale en présure à susciter le développement de la recherche des nouveaux succédanés capables de coaguler le lait, tout en assurant de bons rendements fromagers. Dans cet objectif, la production de la protéase acide extracellulaire par l’espèce fongique Aspergillus niger isolée localement, sur un résidu agroalimentaire peu couteux fermenté par des cultures solides (SSF), a été optimisée de façon à obtenir la meilleure activité coagulante. Un essai de purification et une caractérisation biochimique de l’enzyme ont été également effectués. Les résultats obtenus montrent que la meilleure production de cette enzyme (830 US/g avec un rapport AC/AP de 4,25) a été obtenue sur milieu à base de son de blé (10g), humidifié à un taux de 39,21% par une solution minérale Czapek-Dox à pH 4, incubé à 30°C pendant 72 heures et inoculé par la suspension fongique de 106 spores/ml. L’application du plan factoriel fractionnaire à l’optimisation de la production de la protéase acide d’A. niger, a permis de déterminer l’influence significative du taux d’humidité du substrat et de la quantité en CaCl2 dans le milieu (deux effets contradictoires positif et négatif respectivement) et d’exclure l’importance des autres facteurs du plan d’expérience (la quantité du lait écrémé et celle de la caséine). Une activité coagulante de 582 US/g et un rapport AC/AP de 4,32 ont été obtenus pendant cette étude. La protéase extracellulaire a été purifiée 8 fois avec un rendement d’environ 10%, en utilisant la précipitation au (NH4)2SO4 à 80% de saturation et la chromatographie échangeuse d'ions sur DEAE-A50. La purification était plus efficace dans ces conditions par rapport à l'utilisation de la chromatographie d'exclusion moléculaire sur gel de Sephadex-G100 comme l’étape qui suive la précipitation. L'enzyme a été trouvée sous une forme monomérique, ayant un poids moléculaire de 47,7kDa par SDS-PAGE, résultats confirmés par la zymographie. Les conditions optimales de l’activité coagulante de l’extrait enzymatique partiellement purifié ont été déterminées ; elles correspondent aux paramètres suivants: température de 45°C, pH 5 (protéase acide) et une concentration en CaCl2 de 0,04M. Il présente une stabilité dans la gamme du pH 3,0-5,0 à 4°C pendant 24 heures dans le tampon citrate de sodium (0,1M) et une stabilité thermique jusqu’à 45°C pendant 1 heureItem Identification de deux archaebactéries halophiles strictes isolées à partir des eaux de gisement de quelques champs pétroliers du sud Algérien et contribution à la caractérisation des biomolécules produites(2008) Khemili, SouadLes Bactéries halophiles extrêmes sont prédominantes dans le domaine des Archaea. Elles survivent dans les milieux à très forte concentration en sel (> 1.5M de NaCl). Actuellement, les Halobactéries présentent un grand intérêt grâce à leurs produits bioactives tel que les biosurfactants. Ces derniers ont des applications importantes grâce à leur propriété émulsifiante et activité tension active. Dans le présent travail, nous avons effectué des études microbiologiques, physiologiques et biochimiques des deux souches bactériennes halophiles A et D, leur pouvoir à produire des biopolymères à propriété émulsifiante, ainsi que l'essai de la caractérisation de ces biopolymères. D'après les résultats obtenus, la souche bactérienne A a été rapprochée au genre Halovivax et la souche bactrienne D au genre Haloarcula, au sien de la famille des Halobacteriacaea. Le biopolymère produit peut être un glycoprotéine pour la souche bactérienne A et d'un lipopeptide, glycolipide et /ou glycoprotéine pour la souche bactérienne DItem Extraction et caractérisation des alcaloïdes quinolizidiniques de Cytisus triflorus l'Hérit et l'étude de leurs activités antimicrobienne et antioxydante(2012) Chebili, SihamNotre étude porte sur les alcaloïdes quinolizidiniques de Cytisus triflorus l'Hérit. Cette dernière est connue pour son utilisation traditionnelle dans la région d'Azazga (Algérie) comme plante cicatrisante et dans le traitement de certaines dermatoses. Dans ce sens, une technique d'extraction assistée par les ultrasons est appliquée. L'effet des ultrasons est évalué par rapport aux rendements et au durées d'extraction. L'étude est précédée par une étape préliminaire à fin de sélectionner une méthode conventionnelle d'extraction plus rentable. Les méthodes conventionnelles d'extraction des alcaloïdes quinolizidiniques par un solvant polaire et en milieu acide nous ont donné des rendements de 0,26% et 0,73% respectivement. Dans un deuxième temps, une extraction assistée par ultrasons est réalisée par deux modes de sonication : par sonde et avec un bain à ultrason en milieu acide. L'extraction est menée aussi par bain à ultrasons en utilisant comme solvant un mélange méthanol/acétonitrile (80/20 ; v/v). Les rendements d'extraction sont de 1,83%, 1,10% et 0,95% respectivement. Une cinétique est réalisée où les rendements maximaux sont de 1,16% après 20 min de sonication par sonde ultrasonique, ce rendement est abouti après 90 min de sonication par le bain à ultrasons. Par ailleurs, le renouvellement du solvant d'extraction augmente le rendement obtenu par le bain à ultrasons. Des variations qualitatives et quantitatives de la composition alcaloïdique quinolizidiniques de C. triflorus, en fonction de plusieurs facteurs naturels, sont mises en évidence par CCM et à partir des rendements d'extraction. Nos résultats montrent que l'automne est la saison où le rendement en alcaloïdes est plus élevé, tandis que la teneur en alcaloïdes est plus importante dans les organes jeunes de la plante. Les feuilles de C. triflorus montrent par ailleurs un rendement en alcaloïdes plus élevé que les tiges notamment à l'état sec. Plusieurs alcaloïdes quinolizidiniques sont identifiés par CCM, selon leurs rapports frontaux. Une analyse par CPG/SM d'une fraction alcaloïdique semi-purifiée par CCM préparative a confirmé la présence de la spartéine. L'effet antimicrobien de l'extrait d'alcaloïdes quinolizidiniques des feuilles sèches de C. triflorus récoltée en hiver est plus prononcé pour les bactéries (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae et Escherichia coli). Les CMI sont comprises entre 8,33 et 66,66 µg/mL. Pour les champignons, certains d'eux ont montré une résistance (Aspergillus flavus, Fusarium culmorum et la levure Candida albicans), part contre Aspergillus carbonarius et Botrytis fabae ont révélé une sensibilité notable. Le test du pouvoir antioxydant montre que cet extrait d'alcaloïdes quinolizidiniques présente un bon pouvoir antioxydant 1,71 fois plus élevé que l'acide ascorbiqueItem Exploration moléculaire des dystrophies musculaires en Algérie(2012) Keskas, SabihaFace à des outils moléculaires de plus en plus puissants et pointus, l'exploration des maladies héréditaires chez l'homme suscite un intérêt sans cesse croissant. Malheureusement, les moyens disponibles actuellement dans notre pays ne sont pas à la hauteur des aspirations des biologistes, médecins et patients pour pouvoir mener de front cette bataille contre ces maladies invalidantes, voire pour certaines létales. Les dystrophies musculaires en sont une parfaite illustration puisque déjà poignent à l'horizon des approches thérapeutiques variées visant à stopper ou faire régresser la maladie chez des patients atteints des dystrophies musculaires de Duchenne/Becker (DMD/BMD). Dans notre contexte, nous nous sommes ainsi intéressés à explorer au plan moléculaire un peu plus d'une centaine de patients Algériens présentant l'une ou l'autre de ces deux affections, et ce par criblage du gène DMD, localisé en Xp21.2 et codant la protéine dystrophine, en utilisant une approche de deux PCRs multiplexes visant à mettre en évidence de larges délétions intragéniques dans ce gène. Nous avons ainsi pu poser une étiquette moléculaire de dystrophinopathie pour près de 70% des malades, avec caractérisation fine de l'altération génétique en cause dans leur maladie, soulignant toute la pertinence de notre approche d'investigation et suggérant la forte prévalence de ces deux affections neuromusculaires dans notre population. D'autre part, l'analyse des données générées expérimentalement nous a permis de connaître précisément dans le gène DMD les régions exoniques altérées par les mutations chez ces patients, autant que l'étendue de ces anomalies et la mise en évidence de l'implication préférentielle d'un site mutationnel "hot-spot", le site P20, en position distale par rapport au gène. Egalement, l'utilisation combinée d'analyses bioinformatiques nous a ouvert l'opportunité de caractériser avec exactitude l'effet délétère potentiel que ne manquaient pas de créer les délétions intergéniques identifiées chez les malades, esquissant d'intéressantes corrélations phénotype/génotype en vue d'un diagnostic différentiel entre les deux formes alléliques DMD et BMD. Le présent travail que nous avons réalisé souligne la faisabilité et la puissance de l'approche diagnostique que nous avons suivie, une démarche assez simple à mettre en place dans un laboratoire de biologie moléculaire, reproductible, précise et d'un coût relativement modéré, arguments qui en font une méthode de choix pour explorer les dystrophinopathies dans notre pays, pour contribuer à une meilleure connaissance de sa composante génétique et qui laissent entrevoir son utilisation dans le cadre d'une meilleure prise en charge des malades et dans la mise en œuvre d'un conseil génétique éclairé à l'attention des familles qui en sont demandeusesItem Etude des popupation du genres aspergillus et penicillium et de leurs mycotoxines isolees des epices et des legumes secs(2011) Azzoune, NadiaL'objectif de ce travail est d'étudier les moisissures qui contaminent les épices et les légumes secs commercialisées en Algérie et d'évaluer le pouvoir producteur d'aflatoxines (AFs) et d'ochratoxine A (OTA) des isolats appartenant aux genres Aspergillus et Penicillium. Un total de 70 échantillons (44 échantillons d'épices et 26 échantillons de légumes secs) a été prélevé dans différents points de vente de quatre villes d'Algérie (Biskra, Batna, Alger et Oran). L'analyse de la flore fongique a montré une nette dominance du genre Aspergillus (56,4%), suivie du genre Penicillium (25,2%), le reste des autres genres de la flore fongique est de 18%. Les principales espèces isolées appartiennent aux sections Flavi, et Nigri du genre Aspergillus, ces deux dernières étant les plus dominantes avec 28,9% et 25% respectivement du total d'Aspergillus.L'étude du pouvoir producteur d'aflatoxines des 252 isolats testés a révélé un pourcentage d'isolats aflatoxinogènes de 38 ,9% sur CCM. La production d'aflatoxines varie considérablement d'un isolat à l'autre. La quantification de l'aflatoxine B1(AFB1) par HPLC a révélé des quantités allant de 8,66 à 15313,22 µg/kg du milieu CAM. Par ailleurs, l'analyse par chromatographie sur couche mince a montré que 9,6% des isolats d'Aspergillus et de Pénicillium produisent l'ochratoxine A (OTA) sur un totale de 146 isolats. Le dosage de l'AFB1 dans 25 échantillons (21échantillons d'épices et 4 échantillons de légumes secs) a permis de détecter des quantités allant de 0,08 à 24,34 Àg/kg dans 13 échantillons d'épices (61,9%), cependant l'analyse des échantillons des légumes secs a révélée une absence totale de l'AFB1Item Etude des champignons aflatoxinogenes et ochratoxinogenes isoles des fruits secs et des graines de sesame : influence de la temperature et l'activite de l'eau sur la production de l'aflatoxine B1(2012) Ait Mimoune, NouaraDans notre travail on s'est intéressé à l'étude de la contamination fongique de 57 échantillons de fruits secs et graines oléagineuses (amandes, pistaches et graines de sésame) collectés dans différentes régions d'Algérie. Le dénombrement et l'identification de la flore fongique totale a démontré la dominance du genre Aspergillus (84,69%) suivi du genre Penicillium (9,31%). A partir de ces échantillons, 233 souches d'Aspergillus et 15 souches de Penicillium ont été isolées et testées pour leur capacité à produire les aflatoxines et l'ochratoxine A (OTA). Le potentiel toxinogène de ces différentes souches fongiques a été caractérisé sur milieu CAM pour les Aspergillus section Flavi et sur milieu CYA pour les autres isolats. La détection de la production des mycotoxines a été réalisée par CCM. Les résultats obtenus montrent que sur les 33 isolats d'A. carbonarius 93,93% sont ochratoxinogènes et aucun des isolats d'Aspergillus niger (105 isolats), d'Aspergillus ochraceus (4 isolats) et de Penicilliuim sp (15 isolats) ne produit l'OTA. Pour les 91 isolats d'Aspergillus appartenant à la section Flavi, 88 ont été identifiés comme étant des A. flavus et 3 sont rattachés à A. parasiticus. Ces dernières sont hautement aflatoxinogènes et produisent l'aflatoxine B et G. Pour les A. flavus 34,09% se sont révélés aflatoxinogènes et produisent l'AFB1 uniquement. La production de CPA et de sclérotes a été réalisée sur milieu CYA. Toutes les souches aflatoxinogènes d'A. flavus produisent le CPA alors que 29,2% ont produit des sclérotes de type " L ". Une étude portant sur l'influence de la température et de l'activité de l'eau (aw) sur la croissance et la production d'AFB1 d'une souche d'A. flavus aflatoxinogène a été également réalisée. Nous avons remarqué que l'humidité affecte sensiblement la production d'AFB1 par A. flavus. Une production optimale d'AFB1 a été détectée à 30°C et à une aw de 0,99Item Etude de pistacia atlantica de deux régions de sud Algérien : dosage des lipides, dosage des polyphénols, essais antileishmaniens(2008) Maamri, SarraLa connaissance des guérisseurs traditionnels représente souvent une base pour la recherche pharmacologique et phytochimique sur les médicaments naturels. Ce travail s'est concentré en premier lieu sur l’étude comparative de Pistacia atlantica de deux régions sud - algériennes (Laghouat et Ain Oussera ) , à travers leur teneur en composés phénoliques existants dans les feuilles et les fruits et la teneur de leur fruits en lipides. Puis l’évaluation de leurs activ ité antioxydante et antileishmanienne in vitro. Les résultats obtenus reflètent une variabilité quantitative et qualitative du métabolisme des composés phénoliques des feuilles et des fruits, et celui des composés lipidiques des fruits, que se soit entre Pistacia atlantica des deux régions ou même pour les échantillons de la même région. Donc les polyphénols et les lipides constituent des caractères spécifiques pour chaque pied de Pistacia atlantica étudie ce qui Suggère que ce sont des bon marqueurs moléculaires pour l’étude biogénétique de Pistacia atlantica . Le test d’activité antioxydante montre que ces extraits phénoliques et lipidiques présentent un bon pouvoir antioxydant comparativement aux antioxydants pris comme référence. En outre il reflète tou jours la variabilité du métabolisme des antioxydants dont les pieds de Pistacia atlantica de Ain Oussera sont les plus riches en antioxydants (polyphénols, flavonoïdes, stérols, tocophérols). Un des résultats le plus important, c’est que les extraits phénoliques et lipidiques découvrent des activités antileishmaniennes à différentes concentrations vis -à-vis des formes promastigotes de deux espèces responsables de leishmanioses recensées en Algérie et dans l’ancien monde (L. Infantum : leishmaniose viscérale et L. major : leishmaniose cutanée)Item Essai d'optimisation de la production d'acide lactique sur lactosérum par stroptococcus thermophilus(2008) Boudjema, KhaledStreptococcus thermophilus S13 est une souche de bactéries lactiques thermophiles et homolactique qui produit uniquement l'acide L (+) lactique. L'objectif de cette étude consiste en une optimisation des paramètres physicochimiques (température et pH) ainsi que le milieu de culture pour produire l'acide lactique par cette bactérie sur lactosérum doux déproteiné et stérilisé .Les analyses physicochimiques de lactosérum ont montré que ce dernier présente une qualité adéquat. La température 42°C, pH=6.42, l'adjonction de 1% d'extrait de levure et 2% de lactose ont amélioré la croissance cellulaire ainsi que la production d'acide lactique où μm = 0.412 h-1 et vm =1.095 g/l.h. Cette fermentation a suivi le modèle de Luediking et Piret où elle a mis en évidence un léger découplage entre la croissance et la production d'acide lactique